Shanghai Kekai Biotechnology Co., Ltd.

Enteroquinasa recombinante
Alta especificidad y alta pureza
1. Introducción del producto
La enteroquinasa es una enteroquinasa bovina recombinante de alta pureza. La enzima es purificada por HPLC, pura, específica y no contiene otras proteasas. La enteroquinasa (EC 3.4.21.9) es una proteasa específica que escinde el sitio terminal carboxilo lisina que contiene cuatro ácidos aspárticos en el frente: ácido aspártico-ácido aspártico-ácido aspártico-ácido aspártico-lisina. La enteroquinasa elimina las proteínas de fusión ubicadas en el extremo N de las proteínas para eliminar las etiquetas de fusión no deseadas.
Alta especificidad
1) Proteasas específicas que escinden los sitios terminales carboxilo de lisina que contienen cuatro ácidos aspárticos en frente: ácido aspártico - ácido aspártico - ácido aspártico - ácido aspártico - lisina (DDDDK)
2) Sin otras proteasas, sin escisión inespecífica
Figura 1: Resultados de la prueba SDS-PAGE, una sola banda principal de enteroquinasa purificada
Figura 2: 1U de EK se aplica al análisis SDS-PAGE después de 0min, 10min, 20min, 30min, 40min, 50min y 60 min de sustrato de 50ug
Figura 3: 1U, 2U, 5U, 10U EK actuando sobre sustrato de 50ug después de 4h y 1U EK actuando sobre análisis SDS-PAGE después de 50ug de sustrato 16h

Condiciones de digestión:
De acuerdo con la definición de actividad enzimática, las condiciones de digestión EK recombinante son ejemplos: En el sistema Tris-HCl 8.0 de 25mM:
Concentración de proteína de fusión 0.1-1mg/ml (proteína total 50-100μg)
Dosis recombinante de EK 1-2U
Temperatura 25°C
La digestión nocturna, o digestión completa, toma 12h-16h.

Factores comunes que afectan la actividad de la enteroquinasa
A > 200 mM de imidazol, o > 200 mMNaCl, o > 5% de glicerol, el efecto de la digestión se ve afectado. La digestión enzimática se puede realizar de acuerdo con los siguientes métodos recomendados:
1) Para obtener resultados óptimos de digestión, dialice la muestra en tampón Tris-HCl 8.0 de 25 mM antes de la digestión.
2) Si la diálisis es inconveniente, la muestra se puede diluir, el contenido de imidazol está por debajo de 100 mM, la concentración de NaCl es inferior a 50 mM y la concentración de glicerol es inferior al 5% para la digestión enzimática, y la proporción de dosis de enzima a proteína permanece sin cambios (es decir, 50 μg de proteína se digieren en 1U).
3) Si la solución de muestra contiene uno o más de los componentes anteriores, y es inconveniente eliminar, en este momento, aumentar adecuadamente la cantidad de enzima o prolongar el tiempo de digestión, y también puede lograr un mejor efecto de digestión.

3. Uso del producto
Se utiliza para eliminar proteínas de fusión ubicadas en el extremo N de las proteínas para eliminar etiquetas de fusión no deseadas

Modelo: KK-T008
TAS: 9014-74-8
CE:3.4.21.9
Nombre de la empresa: Shanghai Kekai Biotechnology Co., Ltd